Tässä tutkimuksessa RPA-CRISPR/Cas12a-järjestelmällä saavutetaan nopea (30–40 min), ultra-herkkä (1 kopio/μL) HCMV-detektio kohdistamalla varhainen-ilmentynyt UL123-geeni, mikä ylittää tavanomaiset menetelmät kliinisen näytteiden testauksessa. Tämä innovaatio mahdollistaa varsinkin alhaisen virusinfektion,{{1}diagnoosin ajoissa{{1}. immuunipuutteisille potilaille ja korostaa CRISPR{11}}pohjaisen diagnostiikan toteutettavuutta HCMV{12}}aiheisten sairauksien hallinnan parantamiseksi. Määrityksen yksinkertaisuus ja tehokkuus korostavat sen potentiaalia-hoitotyökaluna{15}}rajoille resursseille{16}}.
RPA-vahvistuskohtien kuviot ja sarjan valinta.
(A) RPA-alukkeen suunnittelu koskien monistusfragmenttien sijaintia. Nuolet osoittavat emäsasemat P1-P6-alukkeilla amplifioidun fragmentin alusta loppuun.
(B) RPA-tuotteen agaroosigeelielektroforeesikuva monistettuna 6 HCMV-alukesarjalla.
(C) Eri yritysten RPA-sarjojen vahvistustehokkuuden seulonta. P: Primer, NC: Negatiivinen kontrolli.
Tulokset osoittivat, että AmpFuture-sarjalla oli suurin vahvistustehokkuus.
MIRA-CRISPR/Cas12a, PCR - Fluorescent Probe Method ja qPCR kliinisissä näytteissä olevien positiivisten osuuksien vertailu.
Keräsimme veri- ja virtsanäytteet 48 kliiniseltä potilaalta. Genominen DNA uutettiin näistä näytteistä käyttämällä TIANamp Genomic DNA Kit -pakkausta, ja UL122-havaitsemisen tulokset analysoitiin PCR-fluoresoiva koetinmenetelmällä. Vertaamalla tuloksiamme kliinisiin diagnooseihin menetelmillämme tunnistettiin 6 positiivista näytettä, jotka olivat negatiivisia kliinisissä testeissä.
