Mira -DNA -isoterminen nopea monistuspakkaus käyttää edistyneitä nukleiinihappojen monistustekniikkaa sekä huoneenlämpötilassa että vakio lämpötilassa (tyypillisesti 39ºC - 42ºC). Apuproteiinien ja yksijuosteisten sitoutumisproteiinien avulla rekombinaasi ja alukkeet muodostavat kompleksin, joka etsii ja sitoutuu siihen kohdehallia-domeeniin. Tämä johtaa D-silmukan alueen muodostumiseen homologisessa paikassa, aloittamalla Strand Exchange. Kun rekombinaasi dissosiaatiokompleksista, polymeraasi sitoutuu alukkeen 3 'päähän aloittaen ketjun jatkeprosessin. Lisäksi hyödyntämällä eksonukleaasiaktiivisuutta, pakkaus käyttää erityisiä templaatille suunniteltuja molekyylikoettimia, mikä mahdollistaa kohdefragmentin monistusprosessin reaaliaikaisen seurannan fluoresenssin havaitsemislaitteiden avulla.
【Piirteet】
Korkea herkkyys
Pakkaus tarjoaa erinomaisen herkkyyden ja spesifisyyden nukleiinihappojen monistukselle.
Nopea reaktioaika
Vahvistusprosessi vie vain 20 minuuttia, mikä tarjoaa nopeita tuloksia.
Kätevä säilytys- ja käsittely
Reaktiokomponentit ovat kuivajauhemuodossa, helppo säilyttää ja käsitellä.
Yhteensopivuus
Yhteensopiva erilaisten fluoresenssin kvantitatiivisten PCR -instrumenttien, vakiolämpötilan fluoresenssin monistusjärjestelmien kanssa.
【Pohjamaalesuunnittelu】
Optimaalisen suorituskyvyn saavuttamiseksi alukkeiden tulisi olla 30-35 bp pitkä. Lyhyet alukkeet voivat vähentää monistusnopeuden ja havaitsemisherkkyyden. Alukkeiden mallien tulisi välttää toissijaisia rakenteita, jotka voivat estää monistumista. Suositeltu ampliconin pituus on 150-300 bp.
【Fluoresoiva koettimen suunnittelu】
Fluoresoiva anturi ei saisi olla päällekkäin erityisen pohjamaalin tunnistuskohdan kanssa. Sen tulisi olla 46-52 nt, vältettäessä palindromisia sekvenssejä, sisäisiä sekundaarirakenteita ja jatkuvia toistuvia emäksiä. Koettimen suunnittelu sisältää neljä muokkauspaikkaa:
- A dspacer(Tetrahydrofuraani, THF) suunnilleen 30-35 nt 5' -lopusta, toimimalla tunnistuspaikkana eksonukleaasia varten.
- A fluoresoiva ryhmäon merkitty THF -sivustosta ylävirtaan.
- A sammutusryhmäon sijoitettu alavirtaan, 2-4 nt lukuun ottamatta fluoresoivaa ryhmää.
- Koettimen 3 'pää on merkitty aestävä ryhmä(Esimerkiksi amiiniryhmä, fosfaattiryhmä tai C 3- välikappale), THF: n ollessa noin 15 nt päässä 3 ': stä.
【Pakkauskoostumus】
|
Compelointi |
Conteltava |
|
Puskuri |
1,6 ml × 1tube |
|
B -puskuri |
150 μl × 1tube |
|
POsitiivisen ohjausmalli |
100 ui × 1tube |
|
Positiivinen hallintakoetin japohjamaali Mix |
70 μl × 1tube |
|
Reagenssi |
48T |
|
Opaskäsikirja |
1 kopio |
【Pakkausvaatimukset】
- Tekniset tiedot: 48 t/pakkaus
Suositut Tagit: Mira -DNA -isoterminen nopea amplifiointipakkausfluoresenssi, Kiinan Mira DNA -isoterminen nopea amplifikaatiopakkausfluoresenssivalmistajat, toimittajat
